文献类型：学位论文

中文题名：长链非编码RNA LINC00461在膀胱癌中生物学功能及其临床意义研究

作者：周逸杰[1];

机构：[1]绍兴文理学院;

导师：潘寿华;绍兴文理学院|徐刚;绍兴文理学院|屠慧惠;绍兴文理学院

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：膀胱癌;LncRNA;LINC00461;EMT

中文摘要：目的:探究长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lnc RNA）LINC00461在膀胱癌（Bladder cancer,BC）中的表达水平及临床意义,研究LINC00461对膀胱癌细胞功能影响,并进一步探索其对上皮间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）信号通路相关蛋白的作用。方法:1.选取2020年10月-2023年10月于绍兴市人民医院泌尿外科行膀胱癌根治术治疗的46例患者临床资料、膀胱癌组织和癌旁正常组织标本（部分为以往收集标本）,后使用逆转录实时定量PCR（Reverse transcription-quantitative real-time PCR,RT-q PCR）检测组织中LINC00461的表达情况,运用χ2检验探究LINC00461与患者病理特征之间的关系;2.运用RT-q PCR检测LINC00461在人正常尿路上皮细胞（SV-HUC-1）和膀胱癌细胞系（EJ、T24、UMUC3、5637）中的表达;3.荧光原位杂交实验（Fluorescence in situ hybridization,FISH）对膀胱癌细胞中的LINC00461进行定位,设计干扰LINC00461表达的si RNA,利用瞬时转染技术转染膀胱癌细胞EJ和UMUC3,同时设置空白对照组（si NC）,使用RT-q PCR检测si RNA转染效率;4.通过CCK-8实验验证LINC00461的表达对细胞增殖的影响;Transwell实验检测LINCC00461对细胞侵袭的影响;划痕实验验证其对细胞迁移的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证其在体内的作用;5.通过蛋白免疫印迹实验（Western blot,WB）检测膀胱癌细胞中LINC00461表达水平对EMT通路相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达水平的影响。结果:1.通过对临床组织标本检测发现,与癌旁组织相比,LINC00461在膀胱癌组织中的表达更高,且LINC00461的表达水平与患者的肿瘤分期和淋巴结转移呈正相关。2.LINC00461在膀胱癌细胞系中的表达高于人正常尿路上皮细胞,此外在EJ和UMUC3细胞中的表达高于T24、5637细胞。3.FISH实验发现LINC00461主要位于细胞质,si RNA转染构建敲低LINC00461的EJ、UMUC3细胞,并且si LINC00461-1和si LINC00461-3的转染效率较si LINC00461-2显著。4.敲低LINC00461后,膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力受到抑制,并且减缓裸鼠皮下瘤生长。5.Western blot实验结果表明,与对照组相比,在敲低LINC00461的细胞中,E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达下降。结论:1.与正常组织相比,LINC00461在膀胱癌组织和细胞中呈高表达,且LINC00461表达水平与患者的肿瘤分期、淋巴结转移呈正相关。2.敲低LINC00461后,膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移能力减弱,且延缓裸鼠体内肿瘤生长。3.LINC00461可能通过EMT信号通路,影响膀胱癌细胞的生物学功能。